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沙眼衣原體的實驗室檢查

更新時間:2020-03-02 12:02:35  推薦指數(shù):

  沙眼衣原體的實驗室檢查包括病原學方法和非病原學方法。病原學方法包括衣原體直接鏡檢、衣原體培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和直接免疫熒光法)、衣原體核酸檢測(包括核酸探針雜交和PCR);非病原學方法包括衣原體抗體檢測(用衣原體抗原檢測血中特異的衣原體抗體)、組織病理和尿白細胞計數(shù)。本篇內(nèi)容主要介紹分離培養(yǎng)與鑒定、藥敏試驗、抗體檢測。

  一、分離培養(yǎng)與鑒定 細胞培養(yǎng)法用于分離培養(yǎng)衣原體,敏感性70%~90%,特異性達99%,此法對技術和設備要求較高且費用昂貴,培養(yǎng)有一定難度,也可能出現(xiàn)假陰性。因此不適合大樣本病例。

  1、雞胚分離培養(yǎng)

  1907年捷克學者Harberstaedter和von Prowazek發(fā)現(xiàn)衣原體開始,各國學者都致力于衣原體的分離純化,但半個世紀內(nèi),由于有可能將某些發(fā)光顆粒(白細胞、上皮細胞、色素顆粒)、細菌和酵母菌誤認為沙眼衣原體,因此此法對于實驗人員的技術水平要求較高。以后,我國著名微生物學家湯飛凡教授用雞胚分離的經(jīng)典方法首次分離成功,從而將衣原體的研究推向了新的高潮。卵黃囊培養(yǎng)對衣原體的早期分離功不可沒,但陽性率低,自有細胞培養(yǎng)后,臨床基本不再使用。

  2、細胞分離培養(yǎng)

  C.t是專性的細胞內(nèi)寄生物,它只能在細胞中生長,McCoy細胞(小鼠成纖維瘤細胞)提供了衣原體生長繁殖的必備條件,因此,常用它來進行培養(yǎng)和檢測。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)法陰性標本盲傳一代后仍為陰性,即確診為陰性。然而有研究報道在一些有經(jīng)驗的實驗室,增加傳代培養(yǎng)的次數(shù)會明顯提高沙眼衣原體泌尿生殖道感染的檢出率。目前,單層細胞和培養(yǎng)基均有商品供應,雖費用較高,但很容易獲得,另外常用的還有HeLa229細胞、BHK21細胞、MCF7,HaCaT細胞和HL細胞株等。細胞培養(yǎng)法一直是沙眼衣原體實驗室檢查的金標準,然而由于敏感性相對較低,不同實驗室檢出的陽性率差別較大,而且耗時、費錢,需要一定的實驗設備,不適用于臨床門診中大量患者的實驗室檢查。

  3、衣原體微量快速培養(yǎng)法

  很多學者對衣原體細胞培養(yǎng)方法做了改進,細胞培養(yǎng)由玻璃瓶改為試管,由試管改為微量快速的96孔板,同時也有改為適用于一般實驗室的平皿法。

  二、藥敏試驗

  日本化學療法學會1992年建立的衣原體最低抑菌濃度(MIC)測定方法是參照衣原體屬國際通用的測定法而制定的標準法,在我國尚未建立衣原體的藥敏試驗標準法。

  三、抗體檢測

  人體感染衣原體后,產(chǎn)生相應抗衣原體抗體,檢測這些特異性抗體可確定有無衣原體感染。檢測血清抗體不同種類的臨床意義也不盡相同。抗衣原體IgM抗體在成人生殖道感染并不常見;抗衣原體IgG抗體陽性率在性活躍人群高,盡管可以無活動性感染,既往感染足以引起陽性;而衣原體特異性血清IgA抗體則與疾病活動存在統(tǒng)計學相關性。用于各型衣原體感染的血清學試驗包括補體結合試驗、微量免疫熒光試驗、間接免疫熒光和酶免疫吸附試驗等。微量免疫熒光試驗和補體結合試驗常用。血清學方法對診斷生殖道衣原體感染的合并癥有意義?;驾斅压苎谆蚋沃車椎呐曰蚧几讲G炎的男性患者血清抗體滴度非常高。此外,用酶免疫法測定衣原體抗體和微量免疫熒光法一樣敏感,但不能用于新近感染。

  血清學試驗的診斷價值有局限性:①到目前為止還沒有一種試驗能完全適用于所有種類衣原體感染;②由于感染早期癥狀較輕微,往往錯過急性期標本的采集時間;③由于血清抗體可持續(xù)很長時間,單一血清標本檢測到的抗體只能說明以前感染過衣原體,只有當恢復期血清抗體與急性期抗體相比滴度有4倍增高并伴有臨床癥狀時才支持目前有衣原體感染。由于敏感性、特異性、預測值不夠理想,血清學檢查不建議作為臨床診斷疾病的活動性的手段。

  目前沒有一個同時具備快速、特異性、敏感、價廉等特點的檢測,再加上沙眼衣原體泌尿生殖道感染臨床表現(xiàn)隱匿,及時診治變得很困難。目前的檢測標本采集主要是尿道和生殖道分泌物(表1、表2),而近年很多研究提示,衣原體感染的胃腸道定植可能是衣原體感染復發(fā)的重要原因,衣原體感染標本采集的困難也是衣原體診治難點之一。

沙眼衣原體檢測試劑
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